紫外分光光度計(jì)（UV-Vis Spectrophotometer）是一種用于測(cè)量物質(zhì)對(duì)紫外光（200–400 nm）和可見(jiàn)光（400–800 nm）吸收特性的分析儀器。它通過(guò)檢測(cè)樣品對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收程度，進(jìn)行定性或定量分析，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、生物、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域。以下是其主要用途和特點(diǎn)：

一、核心用途

1. 定量分析

• DNA/RNA濃度檢測(cè)（260 nm處吸光度，A260）。

• 蛋白質(zhì)定量（Bradford法、BCA法或直接280 nm測(cè)量）。

• 藥物含量分析（如阿司匹林在230 nm處的吸收）。

• 測(cè)定溶液中特定物質(zhì)的濃度（如DNA/RNA、蛋白質(zhì)、藥物成分）。

• 依據(jù)朗伯-比爾定律（吸光度A = εlc，ε為摩爾吸光系數(shù)，l為光程，c為濃度），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算未知樣品濃度。

• 常見(jiàn)應(yīng)用：

2. 定性分析

• 有機(jī)化合物鑒定（如苯環(huán)在250 nm附近有特征吸收）。

• 污染物檢測(cè)（如硝酸鹽在220 nm處吸收）。

• 通過(guò)掃描樣品的吸收光譜（如200–800 nm），判斷物質(zhì)結(jié)構(gòu)或純度。

• 示例：

3. 動(dòng)力學(xué)研究

• 監(jiān)測(cè)化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中吸光度的實(shí)時(shí)變化，推算反應(yīng)速率或中間產(chǎn)物濃度。

4. 純度檢測(cè)

• 通過(guò)吸收峰形和位置評(píng)估樣品純度（如蛋白質(zhì)A280/A260比值判斷核酸污染）。

二、儀器組成與關(guān)鍵部件

1. 光源：氘燈（紫外區(qū)）和鎢燈（可見(jiàn)光區(qū)）。

2. 單色器：將復(fù)合光分離為單一波長(zhǎng)光（光柵或棱鏡）。

3. 樣品室：放置比色皿（石英用于紫外區(qū)，玻璃/塑料僅用于可見(jiàn)光區(qū)）。

4. 檢測(cè)器：光電倍增管（PMT）或光電二極管陣列（PDA）。

三、操作注意事項(xiàng)

1. 樣品準(zhǔn)備

• 液體需澄清無(wú)懸浮物（渾濁樣品需離心或過(guò)濾）。

• 溶劑選擇：避免溶劑在測(cè)量波長(zhǎng)下有強(qiáng)吸收（如苯在紫外區(qū)有吸收）。

2. 比色皿使用

• 紫外區(qū)用石英比色皿（玻璃會(huì)吸收紫外光）。

• 手持比色皿時(shí)避免觸碰光面，需用擦鏡紙清潔。

3. 基線(xiàn)校正

• 測(cè)量前用空白溶劑（如純水或緩沖液）調(diào)零，消除背景干擾。

4. 波長(zhǎng)選擇

• 選擇被測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)（λmax）以提高靈敏度。

四、常見(jiàn)應(yīng)用場(chǎng)景

1. 生命科學(xué)

• DNA/RNA濃度和純度檢測(cè)（A260/A280比值）。

• 酶活性測(cè)定（如NADH在340 nm處吸光度變化）。

2. 制藥行業(yè)

• 藥物含量測(cè)定、溶出度測(cè)試。

3. 環(huán)境監(jiān)測(cè)

• 水質(zhì)分析（如硝酸鹽、重金屬離子）。

4. 食品工業(yè)

• 添加劑檢測(cè)（如防腐劑苯甲酸在225 nm處吸收）。

五、優(yōu)缺點(diǎn)

• 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、成本低、分析速度快。

• 缺點(diǎn)：

• 僅適用于具有紫外或可見(jiàn)光吸收的物質(zhì)。

• 靈敏度低于熒光或質(zhì)譜法，可能受雜質(zhì)干擾。

六、擴(kuò)展功能

部分儀器支持：

• 多波長(zhǎng)掃描：獲取全波段吸收光譜。

• 時(shí)間驅(qū)動(dòng)模式：追蹤反應(yīng)動(dòng)力學(xué)過(guò)程。

• 反射附件：測(cè)量固體樣品（如薄膜、粉末）。

紫外分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)設(shè)備，其數(shù)據(jù)可靠性依賴(lài)于規(guī)范操作和定期校準(zhǔn)（如波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、光度線(xiàn)性檢查）。